Доктор Хаус (в исполнении английского актёра Хью Лори, получившего за эту роль «Золотой Глобус» в 2006 и 2007 годах) — блестящий диагност с двумя основными специализациями: заболеваний почек (нефрология) и в области инфекционных болезней, но из-за некоторых особенностей его характера он не является любимцем пациентов и коллег — он замкнут, резок и циничен, склонен к бунтарству. Он не обременяет себя соблюдением правил хорошего тона, и временами кажется, что он полностью лишён чувства сострадания (что, однако, неверно). Лучше всего говорят о жизненной позиции Хауса слова доктора Формана: «Он не нарушает правила, он их игнорирует», его любимое утверждение — «Все лгут». Как ни странно, именно этот подход нередко помогает ему разобраться в самых сложных и невероятных случаях, а значит спасти жизнь ещё одному пациенту…

Когда-то Хаус перенёс инфаркт четырёхглавой мышцы правого бедра, был прооперирован, и теперь испытывает постоянные сильные боли в ноге, от которых спасается, принимая викодин. Ходит, тяжело опираясь на трость, принимает викодин постоянно, в огромных дозах, зачастую — прямо в присутствии пациентов, без викодина он не в состоянии ни работать, ни просто жить; фактически он — наркоман, знающий о своей зависимости, но не желающий от неё избавляться. Инвалидность и наркозависимость влияют на стиль поведения Хауса, он склонен часто оправдывать свою язвительность и бестактность болью. Хаус активно интересуется теми из своих пациентов, кто, подобно ему, испытывают хронические сильные боли. Значительная часть сериала посвящена теме наркозависимости Хауса и попыткам немногочисленных друзей заставить его вылечиться от неё.

Ассистенты Хауса — молодые и многообещающие врачи: иммунолог Эллисон Кэмерон (Дженнифер Моррисон), невролог Эрик Форман (Омар Эппс) и реаниматолог Роберт Чейз (Джесси Спенсер). В четвёртом сезоне появляются новые ассистенты Тринадцатая (Реми Хадли) (Оливия Уайлд), Лоренс Катнер (Кэл Пенн) и пластический хирург Крис Тауб (Питер Джейкобсон). В пятом сезоне по непонятным причинам Лоренс Катнер совершает самоубийство (актеру Кэлу Пенну предложили должность в президентской администрации, и он принял решение покинуть эту роль). В конце пятого сезона Хаус оказывается в психиатрической лечебнице: на почве злоупотребления викодином у него начинаются системные галлюцинации, влияющие на поведение. В шестом сезоне происходят частые смены в команде. Временно главой диагностики становится Эрик Форман. Уходит Крис Тауб и Тринадцатая, приходит Роберт Чейз и ненадолго Эллисон Кэмерон. Приходит излечившийся от зависимости Хаус, возвращаются Крис Тауб и Тринадцатая (Реми Хадли).

Другие его соратники — доктор Джеймс Уилсон (Роберт Шон Леонард), онколог и, возможно, единственный друг Хауса, и доктор Лиза Кадди (Лиза Эдельштейн), эндокринолог, а также заведующая больницей.